Pri diferencialnem določanju enterobakterij in nekaterih vibrijev zavzema posebno mesto Voges-Proskauerjeva reakcija. Test temelji na sposobnosti bakterij, da fermentirajo glukozo v acetoin.
Bistvo raziskovalnega procesa
V mikrobiologiji se Voges-Proskauerjeva reakcija pogosto uporablja za razlikovanje znotraj družine enterobakterij Yersinia (vključno s povzročitelji psevdotuberkuloze in enterokolitisa), Escherichia coli in aerobov, ki tvorijo spore. Rezultat je vizualiziran z barvanjem medija, ko so dodani določeni reagenti.
Ta test spada v serijo IMViC (okrajšava za Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - skupina identifikacijskih testov, vključno z diferencialnimi definicijami:
- z indolom, ki temelji na razgradnji triptofana v indol, uporabljen v prisotnosti Kovacsovega ali Ehrlichovega reagenta;
- uporabametilrot ali metil rdeča, ki zazna določen pH kot rezultat presnove glukoze;
- Voges-Proskauerjeve reakcije za odkrivanje acetil-metilkarbinola;
- uporaba citrata s spremembo barve zaradi alkalizacije medija.
Bistvo postopka je vizualizacija prisotnosti diagnosticiranih bakterij zaradi interakcije acetoina, ki ga tvorijo, z kavstično pepeliko v prisotnosti kisika. Acetil-metilkarbinol se oksidira v diacetil, ki tvori svetlo rdečo ali rožnato spojino. Povečajte občutljivost testa z uvedbo alfa-naftola pred dodajanjem kavstične pepelike.
Preizkusna nastavitev
Formulacija Voges-Proskauerjeve reakcije vključuje predhodno gojenje mikroorganizmov. Čisto kulturo posejemo na Clarkovo diferencialno diagnostično gojišče, katerega različica je Clarkova juha (brez dodatka agar-agarja). Uporabite lahko že pripravljen medij ali ga pripravite samostojno. Sestavine vključujejo:
- 5g peptona;
- 5g glukoze;
- 5g dvobazičnega kalijevega fosfata;
- 1L destilata.
Med študijo kulturo inokuliramo s sterilno bakteriološko zanko v tekoči medij. Količina - 5 ml v epruveti plus kontrola. Inkubacija se izvaja pri temperaturi 35-37 stopinj dva dni. Nato se izvede študija Voges-Proskauerjeve reakcije v fazah:
- 2, 5 ml jušne kulture se prenese v sterilno epruveto.
- Dodajte šest kapljic alfa-naftola (5% alkoholne raztopine).
- Dodaj 40%raztopina kavstičnega kalija v količini 0,1 ml ali dve kapljici.
- Mešanje se izvaja z nežnim stresanjem epruvete.
- Ocenite rezultat po 15 minutah od začetka poskusa.
Alternativna testna metoda je inkubacija čez noč, katere čas se skrajša na 18 ur ali na en dan. Poleg te metode se uporablja tudi ekspresni test: kulturo v zanko vnesemo v 2 ml gojišča, inkubiramo približno štiri ure, nato dodamo reagente v enaki količini 2-3 kapljic, premešamo in rezultat se oceni po desetih minutah.
Kontrola je eden od povzročiteljev pljučnice Klebsiella pneumoniae - sev atcc 13883.
Ocena rezultata
Po zahtevanem času po dodajanju reagentov (od 5 do 15 minut) je treba opaziti češnjevo rdečo barvo z izrazito pozitivno reakcijo, rdečo in rožnato - s šibko pozitivno reakcijo. Nobena sprememba se ne zabeleži kot negativni rezultat.
Presežek kavstične potaše v raztopini lahko povzroči imitacijo pozitivne reakcije, obarvanje v bakreno barvo. V tem primeru je treba zabeležiti negativni odziv testirane kolonije. Tudi obarvanje bakra se pojavi v primerih, ko je ocena podana eno uro po uvedbi reagentov.
Pri ocenjevanju rezultata je treba upoštevati, da dolgotrajno gojenje preučevanih mikroorganizmov (več kot tri dni) vodi do zakisanosti gojišča, kar lahko privede do napačnega izida študije. Reakcija je lahko blago pozitivna ozlažno negativen.
Zahteve za testne reagente
Reagenti Voges-Proskauer morajo izpolnjevati zahteve, kot so pravilna koncentracija, visoka čistost in stabilnost, kar se doseže s pravilnim shranjevanjem.
Testni kompleti, pripravljeni za uporabo, običajno vsebujejo reagente za 100 ali več uporab in so na voljo v plastičnih ali obarvanih steklenih vialah. Kakovost je urejena z ustrezno dokumentacijo.
