Ta članek bo posvečen pojavu reakcije padavin. Tukaj bomo obravnavali značilnosti formulacije tega pojava, pojav difuzije, splošne značilnosti, vlogo v človeškem življenju in še veliko več.
Uvod v fenomen
Precipitacija je pojav serološkega tipa, pri katerem topni antigeni medsebojno delujejo s protitelesi in posledično opazimo precipitacijo - precipitat.
Splošna značilnost precipitacijske reakcije je oblika usklajen vpliv antigena in protiteles. Te vrste interakcij omogočajo ugotavljanje prisotnosti neznanih antigenov v preskusni snovi z dodajanjem znanih protiteles in antigenov. Proces obarjanja brez prisotnosti soli bo potekal slabše, najboljši optimum pa je v območju 7,0-7,4 pH.
Sestavine reakcije
Med komponentami reakcije padavin so trije glavni elementi:
- Antigen molekularne narave. Je v stanju finega tipa, z drugimi besedami, totopen. Tudi tak antigen imenujemo precipitogen, ki je lizat ali izvleček tkiva itd. Precipitogen ima značilno razliko od aglutinogena, ki je v velikosti delcev, iz katerih je sestavljen. Aglutinogen ima inherentno velikost celice, precipitogeni pa so sorazmerni z velikostjo molekule. Za raztopino antigena je značilna preglednost.
- Protitelo, najdeno v človeškem krvnem serumu, pa tudi v imunsko diagnostičnem serumu, ki vsebuje proučevana protitelesa.
- Elektroliti so raztopine natrijevega klorida, ki so izotonične.
Proizvodnja padavin
Vzpostavitev precipitacijske reakcije je nemogoča brez precipitogena, ki ga dobimo z mletjem materialov in iz njih ekstrakcijo proteinskih antigenov. Ekstrakcija poteka s vrenjem ali drugimi metodami.
Lizati, pa tudi izvlečki tkiv in organov, krvni serum, različne vrste filtratov na osnovi mikrobnih jušnih kultur, pa tudi solni izvlečki mikroorganizmov in avtolizatne snovi so presenetljivi. primer precipitogenov.
Nastavitev v padavinah
Sedaj razmislimo o načinu postavitve reakcije obarjanja.
Izvedemo obročasto-obarjajočo reakcijo, ki poteka v posebej pripravljenih epruvetah. Serum vnesemo v votlino posode in ga prelijemo po steni s pomočjo pipete. Nato se na vrh previdno nanese ustrezna količina oborine, nato pa se cev iz vodoravnega postavi v navpični položaj. Postavitev in upoštevanje reakcije padavin je zelo natančna operacija. Rezultat se zabeleži po pojavu belega obroča na meji med antigenom in protitelesom. Če se reakcijski elementi reakcije medsebojno ujemajo, se vežejo, vendar to postane opazno po daljšem času njihove interakcije
Reakcija obarjanja poteka tudi v petrijevki ali na kozarcu stekelca, kamor se prenese agar gel, ki ga nanesemo v majhni plasti. Ko se strdi v gelu, se izreže manjše število vdolbinic, v katere bodo nameščeni antigeni in protitelesa. To dejanje lahko izvedete na dva načina: metoda radialne imunodifuzije in dvojne imunodifuzije.
Splošne informacije
Mehanika delovanja padavin je podobna napravi za aglutinacijo. Pod vplivom seruma imunskega tipa antigen, ki je že vstopil v reakcijo, zmanjša svojo stopnjo disperznosti. Pomemben pogoj je preglednost tako seruma kot antigena.
Registracijo reakcije lahko izboljšate, če antigene prekrijete na protitelesa. Posledično je mogoče opaziti pojav oborina v obliki obroča. Ta pojav se imenuje obročasta precipitacija in se izvaja v posebnih ceveh s premerom od 2,5 do 3,5 mm. Eden najpogostejših primerov precipitacijske reakcije je diagnoza antraksa.
Precipitacija omogoča določitev stopnje toksigenosti kulture davice v agarju.
Med obravnavano reakcijopride do precipitacije antigenskih kompleksov in protiteles. Padavine so imunološki pojav, ki vam omogoča, da določite količino protiteles v krvnem serumu bolne ali cepljene osebe in živali.
Posledica titracije
Pomembno je vedeti, da podatkov, pridobljenih s titracijo po zgornji metodi, ni mogoče količinsko opredeliti. Za izdelavo in analizo kvantitativne ocene vsebovanega števila protiteles sta M. Heidelberger in E. Kabat razvila posebno reakcijsko tehniko, ki temelji na iskanju in identifikaciji ekvivalenčnega območja. Mešanje starostnega števila antigenov s konstantnim volumnom antiseruma vodi do povečanja prvotno nastale oborine, nato pa se spet zmanjša zaradi povečanja sposobnosti raztapljanja antigenskih kompleksov. Z določitvijo količine protiteles v supernatantih, ki jih vsebuje vsaka epruveta, lahko ugotovite, da bo določenemu številu posod s protitelesi manjkala tekočina. Tu bo v primerjavi z drugimi epruvetami nastala največja oborina. Zaradi tega in odštevanja precipitata antigenske beljakovine od celotne vrednosti beljakovin je mogoče dobiti natančno vrednost protiteles, ki jih vsebuje volumen specifičnega seruma, ki se preučuje. Nadalje se količina beljakovinskih molekul oborine določi s količino dušika ali s kolorimetričnimi metodami.
Vrednotenje vrednosti
Ocenjevanje vrednosti padavin v diagnostični metodologiji mora upoštevati možnost prisotnosti v imunskem serumu protitelesa, ki nima lastnosti precipitina, iz česar sledi, da sama oborina morda ni nastane po reakciji z antigeni. Seznam takšnih molekul vključuje nepopolna protitelesa in nekatere vrste iz skupine gama-A globulinov.
Reakcija padavin v laboratorijskih pogojih najde svojo uporabo v različnih vrstah modifikacij. Reakcija termoprecipitacije se na primer uporablja za odkrivanje bakterijskih antigenov botulizma, antraksa itd., Pri katerih ni termična denaturacija. Za razliko od obročaste precipitacije se pri tej vrsti reakcije uporabljajo filtrati obravnavanega materiala v kuhanem stanju.
Analiza reakcije obarjanja v kompleksni zmesi ne omogoča karakterizacije lastnosti posameznih elementov zmesi. V takih primerih se človek zateče k metodi precipitacije v agarju in uporabi tudi imunoelektroferezo.
razpršene padavine
Na tem področju raziskav obstaja koncept reakcije razpršene precipitacije (RPD). Temelji na sposobnosti difuzije protiteles in topnih antigenov v gelu. Difuzija je sposobnost molekule določene snovi, da prodre v molekule druge, kar nastane zaradi toplotnega gibanja.
Gel je sistem razpršenega tipa, v katerem je tekoča faza enakomerno razporejena v trdni fazi. Najpogosteje se za takšno reakcijo uporablja agar gel.
Po podajanju parametrov vpogojev, pod katerimi se molekule lahko razpršijo druga glede na drugo, bo njihovo srečanje spremljala tvorba kompleksa antigen + protitelo. Takšna neoplazma se lahko razprši v samem gelu in se obori v obliki traku, ki ga je mogoče zaznati s prostim očesom. Če sta antigen in protitelo homologna, ne bo nastal noben pas.
Ustvarjanje pogojev, pod katerimi bo potekala difuzija v agarski plasti, vključuje vlivanje komponent, vendar je skupno število vdolbinic in njihov relativni položaj določena z določi vrsto naloge, ki je potrebna. RPD daje osebi možnost odkrivanja in identifikacije neznanih izoliranih virusov s testiranjem z uporabo znanih serumov protiteles.
Prijava
Padavine se pogosto uporabljajo ne le pri diagnostiki bolezni, ampak najdejo svojo uporabo tudi pri forenzičnem zdravniškem pregledu. Težko si je predstavljati analizo, v kateri je mogoče določiti vrsto krvi, del organa ali tkiva, najdenega na zločinskem orožju, ki ne uporablja reakcije padavin. Pri tem postopku se uporabljajo precipitacijski serumi, ki jih dobimo z imunizacijo različnih živali in ptic. Pomembno je, da raven titra v serumu ni nižja od 1:10000, poleg tega pa mora imeti zadostno specifičnost. Iz zaznanega mesta krvi ali njene skorje se naredi izvleček za fizično. rešitev, ki ji bomo še dodatno izpostavljeniprecipitacijski serum. Po tej reakciji je mogoče določiti vrste tkivnih in organskih beljakovin tako ljudi kot živali. Pridobivanje motnih izvlečkov prisili, da se zatečemo k padavinam na agarju.
Sklepi
Če analiziramo prebrane podatke, lahko sklepamo, da so reakcije padavin za človeka izjemno pomembne, saj omogočajo diagnosticiranje različnih antigenov s pomočjo protiteles, ta pojav se pogosto uporablja tudi pri forenzičnem zdravniškem pregledu in omogoča prepoznavanje vrste kri, tkivo ali organ glede na določen subjekt. Obstaja več vrst in metod padavin, ki se uporabljajo v skladu z nastajajočimi potrebami problema, ki ga rešujemo.
