Različica bakterijskih okužb zahteva jasno identifikacijo patogena in opredelitev njegove vrste. Pri določanju vrste mikroorganizma mikrobiologom pomagajo njegove tinktorialne lastnosti - dovzetnost mikroba za obarvanje z različnimi barvili. Ta metoda vam omogoča, da raziščete morfologijo patogena. Tinktorialne lastnosti bakterij so velikega pomena za praktične in teoretične raziskave na področju mikrobiologije.
raziskave mikrobov
V bakteriologiji obstaja veliko metod za barvanje mikroorganizmov. Vsi temeljijo na tinktorialnih lastnostih bakterij. Obarvanje vam omogoča, da določite njihovo obliko, strukturo, velikost, relativni položaj. To omogoča reševanje problemov sistematizacije vrst mikroorganizmov splošne biologije in primerjalne mikrobiologije.
Zakaj jih barvati
Bakterije so praktičnoprozornih organizmov in so brez uporabe obarvanja slabo vidni za običajno mikroskopijo. Za preučevanje predmetov lahko uporabite posebne vrste mikroskopije (fazni kontrast, temno polje), vendar je najlažji način obarvanje, po katerem bakterije postanejo vidne v običajnem svetlobnem mikroskopu.
Priprava vzorca
Ne glede na uporabljeno tehniko barvanja obstajajo enotna pravila za pripravo preučevanega predmeta. Naslednje faze so obvezne:
- Sterilni instrumenti naredijo razmaz na stekelcu.
- Vzorec se suši. To se naredi pri sobni temperaturi ali z uporabo sušilnih omaric.
- Sledi faza fiksacije - mikroorganizmi se na steklo pritrdijo s posebnimi spojinami.
- Pravilno obarvanje - vzorec je pokrit z barvilom za določen čas, nato pa se spere.
- Končno sušenje - vzorec se ponovno posuši.
Najpogostejša barvila
Najpogosteje uporabljena barvila so na osnovi anilina z različnimi kislinskimi vrednostmi (pH). Večina barvil je praškov, razredčenih v alkoholu.
Barvila, v katerih so kationi barvila, se imenujejo bazična (pH večji od 7). Uporabljajo se lahko za barvanje mikroorganizmov v rdečo (magenta, safranin), vijolično (metil vijolična, tionin), modro (metilensko modro), zeleno (malahitno zeleno), rjavo (krizoidin) in črno (indulin) barvo.
Barvila, v katerih so barvila anioni, se imenujejo kisla (pH manj kot 7). Vzorec bodo obarvali rdeče (eozin), rumeno (picrin) ali črno (nigrosin).
Obstaja skupina nevtralnih barvil (na primer rodamin B), kjer tako kationi kot anioni delujejo kot barvila.
Kultura mrtva ali živa
Metode obarvanja so razdeljene v dve skupini glede na življenjsko obliko preskusnega vzorca.
- Vitalno (doživljenjsko) barvanje. Ta metoda preučevanja lastnosti mikroorganizmov se uporablja pri preučevanju živih tkiv, kar omogoča opazovanje vitalnih procesov mikrobov. Za to barvanje se uporabljajo barvila z nizko toksičnostjo in visoko prodorno močjo.
- Post-vitalno obarvanje. To je obarvanje mrtvih ali ubitih mikroorganizmov. Zahvaljujoč tinktorialnim lastnostim bakterij mikrobiologi določijo njihovo strukturo. To barvanje je najbolj razširjeno.
gram-pozitivne in gram-negativne
Prav te lastnosti bakterij lahko najdete v navodilih za različna zdravila. Ta metoda preučevanja tinktorialnih lastnosti bakterij temelji na uporabi barvila gentian violet in fiksaciji joda. To je tehnika Hansa Christiana Grama, danskega zdravnika, ki jo je predlagal leta 1884. Zaradi tega obarvanja so bakterije razdeljene v dve skupini:
- Gram (+) - postane modro(stafilokoki in streptokoki).
- Gram (-) - obarvajte rožnato do rdeče (enterobakterije, salmonela, E. coli).
Različni rezultati obarvanja so posledica različnih tinktorialnih lastnosti bakterijskih sten. Metoda obarvanja po Gramu je še vedno glavna pri diagnostiki nekaterih nalezljivih bolezni.
Druge tehnike barvanja
Opišimo še nekaj metod, ki se pogosto uporabljajo v bakteriologiji.
- Ziehl-Nelsonova metoda - določa kislinsko odpornost bakterij. Identificira povzročitelje tuberkuloze in mikobakterioze.
- Tehnika Romanovsky-Giemsa - obarva acidofilne (ocetna kislina in mlečna kislina) bakterije rdeče, bazofilne (spirohete in protozoe) pa modro.
- Morozovljeva tehnika - obarva bakterije v rjavo barvo in naredi njihove bičice vidne.
Spore je mogoče videti
Tsielovo obarvanje s fučinom vam omogoča, da vidite bakterijske spore. Po obarvanju imajo rožnato barvo in so jasno vidni na ozadju modrih bakterij. Ta metoda je tudi orodje bakteriologije in je velikega praktičnega pomena.
